【让人变胖的表观修饰】 近日,华中农业大学的研究人员对脂肪生成的转录后调控机制这块领域有了新进展,阐明了锌指蛋白Zfp217的转录调控机制。 Zfp217是众所周知的致癌蛋白,在多种癌症中上调,对胚胎干细胞的分化至关重要。同时,Zfp217将基因转录与新生RNA上的m6A修饰紧密关联。 为了探索Zfp217在成脂分化中的作用,研究人员首先利用siRNA开展了功能缺失实验。Zfp217的敲低明显阻断了脂肪生成,表现为油红O染色水平下降,以及关键成脂基因PPARγ、aP2、LPL和脂联素的表达水平降低。此外,利用CRISPR-Cas9系统完全敲除Zfp217基因后,3T3L1细胞中的脂肪生成完全被破坏。 为了筛查Zfp217在3T3L1细胞中的功能,研究人员通过斑点印迹和液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测了mRNA中的m6A修饰。与对照组相比,利用siRNA和CRISPR-Cas9系统处理后,3T3L1细胞中的m6A水平总体上增加。与野生型细胞相比,Zfp217+/-小鼠胚胎成纤维细胞的m6A修饰也明显增加。这些结果表明Zfp217对细胞m6A RNA甲基化至关重要。 此外发现,Zfp217被敲低后,甲基转移酶METTL3的表达增高,而去甲基化酶FTO的表达降低。进一步的研究表明,FTO的mRNA水平受到Zfp217过表达或敲低的调控。 总的来说,这项研究首次证明了Zfp217在脂肪生成中的复杂作用。Zfp217与m6A去甲基化酶FTO的启动子直接结合,并与m6A“阅读器”蛋白YTHDF2相互作用,从而增强了FTO对m6A RNA的去甲基化酶活性。最终,Zfp217以依赖于m6A-YTHDF2的方式促进脂肪生成。